Diabetologia：激活但功能受损的记忆Tregs在1型糖尿病患者进展缓慢的过程中逐渐拓展

从第一次成现呼吸道胃溃疡反应到成现1改型冠心病诊疗病症的十分困难率在学龄前中期就有极佳的所述，多个呼吸道胃溃疡反应特征性的学龄前里有70%在血清切换后10年内肺结核冠心病，而随访15年的学龄前这一比例上升到84%。来得之下，%诊疗1改型冠心病一半以上的改型1改型冠心病的得病组态还没有人得到确实的研究成果。

愈加多的人开始采用分期系统来表述1改型冠心病的十分困难：群本体在成现多种呼吸道胃溃疡反应时重回第1阶段，成现血糖极其时重回第2阶段，成现病症时重回第3阶段。一些多发呼吸道胃溃疡反应特征性的群本体，在1期和2期，十分困难较慢速，并发展为得病的1改型冠心病。我们之前所述了一四组在首次验证到多种呼吸道胃溃疡反应抽样后至不算10年无冠心病的极快速十分困难者，这四组病症人数不算，但不同之处非常明确。随后，我们发现呼吸道自身抗本体抗本体CD8+T酶质反应在十分困难较快速的病症里理论上不实际上，但在早先得病和仍然实际上的冠心病病症里很容易验证到。这有可能说明了，与十分困难病症来得，这些病症胃溃疡反应的闭环增强。

早期研究成果说明了，尽管闭环性T酶质(Treg)总数长时间，但冠心病病症实际上一些功能不足之处，其里最主要对IL-2的反应能力提高。此外，冠心病病症里的波动CD4+T酶质有可能对闭环极富抵抗性，表现为波动T酶质的选择性减慢，自然产生的Treg和本体外产生的其会Treg，以及抗本体境遇的CD4+T酶质里IL-2反应减慢。本研究成果的目的是所述了CD4+闭环性T酶质(Treg)在一小群极较快速十分困难者里的不同之处，他们的平均年龄为43岁(31-72岁)，随访短时间为18-32年。

方法：BOX研究成果是一项以成年人为基础的纵向研究成果，在21岁以下确诊的病症亲属里定期检查1改型冠心病的危险因素。我们之前所述了仍然较快速十分困难者的不同之处，他们保证多重呼吸道胃溃疡反应特征性最少10年，但没有人成现冠心病的诊疗病症，慢速性或非顺利完成性胃溃疡。随后，10名继续保证无冠心病并乐意提供大量血清抽样的较快速十分困难者纳入T和B酶质功能统计分析。在现有的研究成果里，8名慢速十分困难者(SP四组)，里位年龄43岁(31-72岁)，18 - 32岁密切关系的呼吸道胃溃疡反应特征性。所有的旁观者都正处于1改型冠心病十分困难的1期，尽管一些人随后失去了呼吸道胃溃疡反应对某些抗本体的特征性反应，然而，一名病症已经正处于2期至不算6年，但没有人成现诊疗病症，一名病症被治疗为冠心病，该受试者72岁，在捕获科学实验抽样时，其HbA1c上升时到53 mmol/mol(7%)，在数据统计分析里对该酪氨酸顺利完成了实质上评估。转化外周血单个核酶质(PBMCs)，采用多变量流式酶质法术和T酶质选择性试验性评估酪氨酸里Treg的高频率、表改型和功能。采用FlowSOM和CITRUS(聚类鉴定、表征和回归)顺利完成无全权负责聚类统计分析，评估Treg表改型。

结果：与有益酪氨酸来得，来自慢速十分困难本体的清醒CD4+T酶质的全权负责聚类说明了，激活的清醒CD4+ Treg高频率上升，与糖皮质激素其会的TNFR就其酶(GITR)暗示上升有关。一名HbA1c上升时的病症与十分困难较快速者和匹配的相符合四组来得，Treg谱有所不同。功能统计分析说明了，与有益酪氨酸来得，来自较快速十分困难本体的Treg依赖性的CD4+波动T酶质选择性明显毁坏。表现为对波动CD4+T酶质CD25和CD134暗示的选择性上升。

平面图1 深入的表改型统计分析说明了，CD4+Treg亚改型在慢速十分困难所述符里上升。由FlowSOM转化的Treg四楼，有数在来自所有酪氨酸的活CD4+CD45RA -酶质上。根据标示物暗示鉴定成10个元簇:清醒T酶质_1;清醒T cell_2;清醒T cell_3;清醒T cell_4;CD49b清醒T酶质;HLA-DR + GITR +清醒T酶质;内核Treg_1;内核Treg_2;内核Treg_3;和内核Treg_4。(a)采用9个不同Treg标示转化的10个元簇的MST。每个链表都是一个协同(100个协同)，更多的元协同(10个元协同)在链表四组周边着色。每个链表里的饼平面图指成单个标示的暗示行政级别。(b)每个元聚类的热平面图，以说明了整本体标示暗示。(c, d)为HD四组(c)和SP四组(d)转化平面图，以及FlowSOM识别的每个元簇的覆盖层。(e-l)相比金属量为每个metacluster罐本站平面图(金属量> 0.05%)确定为HD和SP四组:内核Treg_2 (e),内核Treg_3 (f),内核Treg_4 (g), HLA-DR + GITR +清醒T酶质(h)、清醒T cell_1(i),清醒T cell_2 (j),清醒T cell_3 (k) n d CD49b清醒T酶质(l)。绿色左上方都是**SP 606。**p< 0.01, Wilcoxon配对大写秩检验。此键适用于平面图形部分(a)， (c)， (d)和d (e-l)

平面图2 采用CITRUS的预测模改型猜测，Treg高频率的上升是十分困难较快速的logo。级别除此以外(a - f)和柑橘统计分析(g-k)比较SP旁观者和匹配的HD旁观者在CD4+CD45RA−T酶质上的差异。(a)亲本CD25+ cd127 lotreg和CD25loCD127+T c e l成年人的都是性平面图。CD25+ cd127lotreg被CD39和FOXP3富集，然后通过HLA-DR和GITR暗示顺利完成转化，建模FlowSOM成年人。(b) HD(白斑)和SP(蓝点)四组以及酪氨酸SP 606(绿色)里CD25+ cd127的高频率摘要平面图。(c-f) CD25+CD127loCD39+FOXP3+和CD25loCD127+除此以外子集的罐本站平面图;(c) HLA-DRloGITR−(内核Treg_2)， (d) HLA-DRintGITRlo(内核Treg_3)， (e) HLA- d RhiGITR+(内核Treg_4)， (f) HLA- d RhiGITR+(HLA-DR+GITR+内核T cell)。(g - i)油菜簇旋转由(g) CD127， (h) CD25和(i) FOXP3暗示风速着色，交叉突成的簇被识别为SP和HD所述符密切关系的不同。(j)罐本站平面图说明了了在SP(蓝点)和HD(灰点)四组里，CITRUS清醒Treg_3和Treg_4的相比金属量(比例)。(k)直方平面图说明了每个簇的表改型(粉红色)和Treg标示相比暗示与着重暗示(黄色);上列，内核Treg_3;示意图动身，内核Treg_4。着重与所有其他簇里标示的暗示有关。*p< 0.05， **p< 0.01, Wilcoxon配对大写秩检验

平面图3 与有益献血者来得，十分困难较快速者清醒treg的GITR上升。每个清醒CD4+T酶质元簇(清醒T酶质_1;清醒T cell_2;清醒T cell_3;CD49b +清醒T酶质;HLA-DR + GITR +清醒T酶质;内核Treg_2;内核Treg_3;来自FlowSOM的memory Treg_4)验证每个暗示标示的推移。(a,b)来自HD (a)和S (b)所述符的暗示热平面图(sp606不最主要在内)。(c,d)清醒Treg_4元簇里所有HD(灰色)、所有SP(黄色)和SP 606(绿色)的FlowSOM GITR暗示串接，说明了直方平面图(c)和摘要平面图(d)。Wilcoxon配对大写秩和检验，p< 0.07(绿色)所有酪氨酸最主要，p< 0.05(黄色)酪氨酸SP 606和匹配的HD不最主要在测试里。(e,f) HLA-DRhiGITR+Tregs里GITR暗示，从级别除此以外，从所有HD(灰色)、所有SP(黄色)和SP 606(绿色)串接，说明了直方平面图(e)和摘要平面图(f) *p< 0.05, Wilcoxon配对大写秩检验

平面图4 来自较快速十分困难的CD4+ treg酶质控制波动CD4+T酶质的能力提高。SP四组用黄色的本站和左上方指成，HD四组用黑色的本站和左上方指成，绿色的本站/左上方指成酪氨酸sp606。采用CD4+CD25+ Treg分选试剂盒对CD4+T酶质顺利完成分选。CD4+CD25−(反之亦然者)被标示为CFSE, Treg按仔细观察的比例高锰酸钾。用抗CD3 /28微珠转化酶质，培训3过后顺利完成流式酶质法术验证。(a-d)与CD4+反之亦然者相比应的treg培训(自本体)(e-h) HD、SP或SP 606 Treg与HD反之亦然者培训。(a,b,f) CFSE其会(a,e)和CFSE选择性百分比(b,f)。(c, d,h) CD25 (c,g)和CD134 (d,h)的选择性百分比。采用特征性相符合(激活的响应酶质则有treg)计算选择性百分比。*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001，重复测量双向方差统计分析。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

平面图5 波动CD4+T酶质对较快速十分困难的T酶质转化的选择性更极端。SP四组用黄色的本站和左上方指成，HD四组用黑色的本站和左上方指成，绿色的本站/左上方指成酪氨酸sp606。采用CD4+CD25+Treg分选试剂盒对CD4+T酶质顺利完成分选。CD4+CD25−(反之亦然者)被cfsel标示，treg按仔细观察的比例高锰酸钾。用抗CD3 /28微珠转化酶质，培训3过后顺利完成流式酶质法术(CD25反染)和酶质因子统计分析。HD Treg与HD、SP或sp606反之亦然者共同培训。(a,b) CFSE其会(a)和CFSE选择性百分率(b)。(c,d) CD25选择性百分率(c)和CD134选择性百分率(d)。(e,f) IFN-γ(e)和IL-17A (f)在上海交通大学里的暗示。***p< 0.001， **p< 0.01，重复测量双向方差统计分析。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

结论：我们结论的结论是，来自较快速十分困难子的转化清醒CD4+Treg在GITR暗示里得到了延展和丰富，强调了再进一步研究成果Treg在1改型冠心病安全性群本体里的关联性的必要。

文中成处：

Boldison J, Long AE, Aitken RJ,et al.Activated but functionally impaired memory Tregs are expanded in slow progressors to type 1 diabetes.Diabetologia 2021 Oct 28